Hematoxilina-Eosina

La Hematoxilina (C.I. 75290) es un compuesto que se obtiene de la planta leguminosa Haematoxylum campechianum , conocida también con el nombre de palo de Campeche. Es un producto natural que al ser oxidado constituye una substancia de color morado oscuro denominada hemateína

Se utiliza en histología para teñir los componentes aniónicos (ácidos) de los tejidos, a los que da una coloración violeta. Tiñe intensamente los núcleos de las células, dado que estos contienen ácidos nucleicos ricos en radicales ácidos.

Tal como se obtiene de la planta e incluso luego de sufrir el proceso de oxidación, su capacidad de tinción es muy limitada. Por lo tanto, debe combinarse con iones metálicos, especialmente las sales de hierro (III) o aluminio (II), que actúan como mordientes.

Si bien la hematoxilina es una sal neutra, suele ser denominada como un colorante básico, ya que el componente cromógeno reside en el complejo catiónico (básico) de la misma. Es de notar que la tinción histológica por hematoxilina no indica tanto la constitución química de los componentes celulares, sino la densidad de cargas eléctricas negativas de los mismos

La Eosina es un colorante basofilo (afinidad con lo básico, porque es acida), en forma de polvo rojo cristalino, de uso ampliamente extendido en el ámbito industrial, desde la industria textil hasta el estudio biológico e histológico. Como curiosidad, también se utiliza en la coloración de la gasolina.

La eosina ya era de uso común a finales del s.XIX, siendo el resultado de la acción del bromo sobre la fluoresceína. Actualmente existen dos compuestos conocidos como eosina y que están íntimamente relacionados:

• la eosina Y (C₂₀H₈Br₄O₅, tetrabromofluoresceína, CI 45380, CI 45386), comúnmente conocida como eosina amarilla, y

• la eosina B (C₂₀H₈Br₂N₂O₉, dibromodinitrofluoresceína, CI 45400), también conocida como eritrosina B azulada.

 

Ambas, en principio, son intercambiables, sin que sean notables las diferencias entre ellas en el resultado de la tinción, por lo que la preferencia de una sobre otra suele seguir un criterio subjetivo. A pesar de ello, la eosina Y es la más utilizada en procedimientos rutinarios histológicos, como tinción de contraste en la técnica de la Hematoxilina Eosina, y su preparación alcohólica es un paso obligado en la Técnica de Papanicolaou.

La eosina es un compuesto ácido cuya propiedad está basada en su polaridad negativa, lo que le permite enlazarse con constituyentes celulares de carga positiva. Por ello colorea componentes y orgánulos citoplasmáticos, colágeno y fibras musculares, pero no los núcleos (que son básicamente ácidos nucleicos y están cargados negativamente). Aquellos componentes que se tiñen con eosina son conocidos como acidófilos o eosinófilos.

La coloración resultante de la tinción con eosina es rosada-anaranjada para citoplasmas, y rojo intenso en el caso de los eritrocitos. Es fuertemente fluorescente, aunque esta característica es muy poco utilizada.

La eosina es un colorante muy usado en tinciones de vitalidad. Al ser un colorante aniónico (carga negativa) no penetra en el interior celular a no ser que la membrana sea permeable. Esto solo sucede en células muertas. Por tanto, en una tinción con eosina encontraremos células con el interior teñido (muertas) y células solo teñidas en su entorno (vivas).

Procedimiento de tinción

La tinción hematoxilina-eosina corresponde a la mezcla de hematoxilina y eosina.

La tinción hematoxilina y eosina es el método más popular de tinción utilizado en histología y medicina diagnostica.

El método supone la aplicación de la tinción de hematoxilina, que por ser catiónica o básica, tiñe estructuras ácidas (basófilas) en tonos Azul y Púrpura, como por ejemplo los núcleos celulares; y el uso de eosina que tiñe componentes básicos (acidófilos) en tonos de color rosa, gracias a su naturaleza aniónica o ácida, como el citoplasma.

Técnica

• Sumergir los preparados histológicos en xilol para eliminar los excesos de parafina.
• Luego pasan por una serie de alcoholes (100°. 95° y 70°).
• Se lava en agua para eliminar exceso de alcohol
• Se sumerge en hematoxilina por 10 minutos, luego se lava en agua para eliminar excesos y se pasa rápidamente por alcohol ácido.
• Se lava nuevamente
• Se sumerge 30 segundos en eosina.
• Se pasa por otra serie de alcoholes, en orden creciente (70°, 95° y 100°).
• Finalmente se deja remojar 10 minutos en xilol, antes de realizar el montaje final

 

Resultados

• Núcleo celular: Azul
• Citoplasma: Rosa
• Musculatura: Rojo , rosa o fucsia
• Glóbulos rojos: Rojo, anaranjado
• Fibrina: Rosa

                             

                

Bibliografia:

Raimundo Garcia del Moral, Manual de laboratorio de anatomia patologica, Editorial interamericana Mac Graw Hill, año 1993

Edna B Prophet, Bob Mills, Jacquelyn B.Arrington, Leslie H.Sobin, M.D  Metodos Histotecnologicos del intituto de patologia de las fuerzar armadas EE.UU

Autores:

Ilarraza Aleida

Landaeta Yetzariz

Leon Anais

Marquez Gariellys

Merchor Gustavo

III semestre de Histotecnologia, Universidad de Carabobo Facultad de Ciencias de la Salud, Escuela de Ciencias Biomédicas y Tecnologicas.